Analiza cromosomică a sângelui periferic
Sângele recoltat în condiţii sterile prin puncţie venoasă poate fi folosit pentru analiză cromosomică.
Dintre cele trei categorii de celule sanguine, doar leucocitele (celulele albe) pot fi utilizate pentru analiză cromosomică.
Datorită numărului mic de celule în diviziune, analiza cromosomică este efectuată după realizarea unei culturi celulare de scurtă durată.
Cultura este realizată în incubator la 37 grade Celsius, se face în condiţii de asepsie (în absenţa oricărui microorganism) şi durează 3 zile.
La sfârşitul culturii, activitatea celulelor în diviziune este blocată, folosind o substanţă toxică: colchicina.
În continuare, se face prelucrarea culturii, etapele esenţiale ale acesteia fiind fixarea (care asigură omorârarea celulelor, cu menţinerea aspectului lor) şi etalarea într-un strat monocelular pe lame de microscopie.
Celulele etalate pot fi analizate la microscop după colorare directă sau colorare după aplicarea unei metode de marcaj cromosomic.
La microscopul optic sunt analizate minimum 16 celule, fiind număraţi cromosomii şi verificat aspectul acestora, cu scopul identificării unor eventuale anomalii cromosomice numerice sau structurale. Dacă sunt găsite celule cu număr diferit de cromosomi comparativ cu numărul normal de cromosomi, sunt verificate alte celule, analiza vizând 32, 64 sau 96 de celule, în funcţie de tipul de anomalii identificate.
Dintre celulele analizate sunt selectate 6 – 8 celule cu cromosomi lungi, bine individualizaţi, lipsiţi de suprapuneri şi cu un marcaj cromosomic de bună calitate. Aceste celule sunt captate folosind o cameră video, iar imaginea este stocată în memoria computerului. Imaginile stocate sunt prelucrate folosind un program special de cariotipare. În final, pentru fiecare din celulele ale căror imagini au fost stocate este realizat un cariotip.
Cariotipul reprezintă aranjarea în perechi a cromosomilor unei singure celule, pe baza unor elemente morfologice caracteristice şi a modelului de benzi, aspecte ce sunt standardizate internaţional.
Cariotipul celulei cu aspectul cel mai bun va fi ataşat la buletinul de analiză.
Prof.dr. Eusebiu Vlad Gorduza